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新聞詳細

核酸檢測類產品問答
釋出者│·:handler 釋出日期│·:2020-01-06

核酸檢測類產品

 

1.目前“牧康靈”檢測相關產品有哪幾大類₪╃•?

答│·:目前我們有三大類檢測產品│·:一是核酸類產品✘₪,包括熒光定量PCR檢測配套產品;二是病毒抗原(蛋白)類檢測產品✘₪,包括常見豬病的膠體金抗原快速檢測卡;三是豬健康體檢類產品✘₪,包括豬的寒度檢測試劑盒▩▩₪··、朊度檢測試劑盒和活度檢測試劑盒等↟╃╃☁✘。

 

2.牧康靈核酸檢測類產品的優勢?

答│·:核酸檢測包括核酸提取和PCR反應兩個步驟✘₪,所以包括兩種試劑盒↟╃╃☁✘。

其中核酸提取試劑盒我們更專業✘₪,特別是針對非洲豬瘟病毒檢測✘₪,養殖場對於臨床唾液樣本採集和環境監測的特殊要求✘₪,我們開發了高效準確的唾液樣本核酸提取試劑盒和環境樣本核酸提取試劑盒✘₪,透過實驗對比驗證✘₪,這兩種提取盒的效率是普通試劑盒提取量的10倍以上↟╃╃☁✘。

其次是熒光定量PCR檢測試劑盒✘₪,透過實驗室對比檢測✘₪,我們PCR試劑盒的靈敏度不僅檢測血液樣本靈敏度是100%✘₪,而且檢測唾液和環境樣本靈敏度也高達100%✘₪,對於豬場精準檢測✘₪,精準清除具有更好的指導意義↟╃╃☁✘。

 

3.非瘟檢測豬唾液樣本為何要用唾液專用核酸提取盒✘₪,普通提取試劑盒不能提取嗎₪╃•?

│·:中國動物疫病預防控制中心釋出的第二批非洲豬瘟現場快速檢測試劑名單✘₪,包括26個企業的34個產品↟╃╃☁✘。但是實驗室測評和篩選產品時✘₪,檢測樣品型別僅限於豬血液和豬組織樣品↟╃╃☁✘。但是豬場在非瘟形勢下想存活下來✘₪,要靠早期監測生物安全防控效果✘₪,用的樣本大多是豬的唾液和環境物質✘₪,非瘟病毒含量低✘₪,並且不同樣本的核酸含量▩▩₪··、酶含量▩▩₪··、特殊雜質含量都不一樣↟╃╃☁✘。所以說✘₪,目前不配套核酸提取試劑盒✘₪,僅含有核酸提取液的非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒或提取效率低的核酸提取試劑盒並不能滿足豬場的臨床檢測需求↟╃╃☁✘。

4.唾液樣本有何特殊性₪╃•?

答│·:首先✘₪,唾液樣本中含有豐富的酶類物質│·:有溶菌酶▩▩₪··、唾液澱粉酶▩▩₪··、過氧化物酶▩▩₪··、鹼性磷酸酶▩▩₪··、酸性磷酸酶▩▩₪··、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶▩▩₪··、丙酮酸激酶▩▩₪··、谷胱甘肽還原酶等✘₪,大量酶類物質會對病毒的核酸有一定的降解作用↟╃╃☁✘。其次✘₪,唾液樣本病毒含量本身較低✘₪,提取效率不高的試劑盒直接影響檢出率↟╃╃☁✘。

 

5.唾液樣本核酸提取盒專門用於提取唾液✘₪,那血液或其他樣本可以提取嗎₪╃•?

答│·:唾液樣本核酸提取試劑盒適用於從唾液樣本中提取基因組DNA↟╃╃☁✘。試劑盒採用獨特的裂解液和緩衝液系統✘₪,配合高效吸附DNA的吸附膜✘₪,在一定條件下對唾液中含量不多的DNA具有極強的吸附富集能力✘₪,當條件改變時又可以可逆地釋放DNA✘₪,從而達到快速分離純化DNA▩▩₪··、並最大限度地去除蛋白質等雜質的目的✘₪,從而保證提取核酸的純度↟╃╃☁✘。

其他血液和拭子樣本也可以用該試劑盒提取✘₪,但相對而言✘₪,該試劑盒更適用於唾液樣本↟╃╃☁✘。

血液樣本可用普通核酸提取試劑盒即可✘₪,其他簡單的拭子樣本也可用該試劑盒提取✘₪,但若是樣本型別複雜▩▩₪··、含雜質較多✘₪,建議用環境樣本核酸提取試劑盒高效提取↟╃╃☁✘。

 

6▩▩₪··、針對唾液樣本中非洲豬瘟病毒的檢測✘₪,怎樣檢測更靈敏₪╃•?

答│·:首先唾液樣本檢測要用專門的唾液樣本核酸提取試劑盒來提取病毒核酸✘₪,這樣能更精確的抓住唾液樣本中少量的病毒核酸✘₪,便於下一步擴增檢測↟╃╃☁✘。其次✘₪,PCR檢測要選用高度靈敏的反應試劑盒✘₪,普通檢測血液樣本的PCR試劑盒還不能滿足唾液樣本中低濃度核酸的檢出↟╃╃☁✘。所以兩種試劑盒是配套✘₪,是檢出唾液樣本中非洲豬瘟病毒的關鍵↟╃╃☁✘。

 

7.環境樣本核酸提取試劑盒主要針對什麼型別的樣本₪╃•?

答│·:環境樣本核酸提取試劑盒是專為環境樣本DNA提取而設計的✘₪,適合從各種環境如豬場土壤▩▩₪··、底泥▩▩₪··、漏縫地板以及各種動物糞便▩▩₪··、尿液✘₪,豬舍內外地面▩▩₪··、牆面✘₪,運輸車輛各部位和人員頭髮▩▩₪··、衣物等處採集樣本✘₪,採用棉拭子蘸取足量此類樣品✘₪,從中提取高產量▩▩₪··、高純度的核酸DNA↟╃╃☁✘。

 

8.環境樣本核酸提取試劑盒效果與普通核酸提取步驟有何不同₪╃•?

│·:產品試劑組成除了有傳統的裂解液▩▩₪··、洗液和洗脫液✘₪,還針對環境樣本的複雜性和特殊性✘₪,增加了幹珠管▩▩₪··、S2增強裂解液▩▩₪··、S3-腐殖酸吸附劑和S4-結合液✘₪,其中幹珠管可以更好的分散樣本✘₪,讓樣本與裂解液充分接觸和裂解✘₪,S3吸附劑可選擇性吸附DNA樣品中的腐殖酸等抑制因子✘₪,提高DNA純度✘₪,檢出效率更高↟╃╃☁✘。增加了試劑從而增加了處理步驟✘₪,但最終提取的核酸效率是普通提取盒的10-100倍↟╃╃☁✘。

 

9.唾液和環境樣本核酸提取試劑盒的洗液在使用前都要加相應體積的無水乙醇嗎₪╃•?

答│·:是的↟╃╃☁✘。每個新提取盒第一次使用前✘₪,在兩種洗液裡面都要按說明書加入相應體積的無水乙醇才能使用↟╃╃☁✘。無水乙醇屬於易燃易爆化學試劑✘₪,所以不能直接放在試劑盒裡運輸✘₪,需要使用單位自行購買準備↟╃╃☁✘。如果不能購買到實驗室用的無水乙醇✘₪,可用醫用的95%酒精代替✘₪,但注意不要購買還其他複方成分的95%酒精✘₪,一定是單一成分的酒精↟╃╃☁✘。

 

10.非洲豬瘟病毒檢測有哪些檢測產品可供選擇₪╃•?

答│·:目前非洲豬瘟檢測有膠體金快速檢測卡和熒光定量PCR檢測試劑盒兩種↟╃╃☁✘。

膠體金快速檢測卡優點是操作簡單✘₪,檢測快速✘₪,缺點是準確度只有60-70%✘₪,且僅適用於發病豬的血液樣本檢測↟╃╃☁✘。

豬場早期監控和生物安全防控檢測都需要用靈敏度高的熒光定量PCR檢測試劑盒✘₪,樣本最好是無創採集豬唾液樣本進行檢測↟╃╃☁✘。

除了PCR反應盒要選擇高度靈敏的檢測試劑盒✘₪,核酸提取步驟也要用唾液和環境樣本專用核酸提取試劑盒↟╃╃☁✘。這樣全面配套✘₪,才能保證檢測結果的準確性✘₪,發揮豬場早期檢測的精準監控作用↟╃╃☁✘。

 

11.PCR檢測對基層豬場的實驗環境條件有何要求₪╃•?

答│·:基層豬場PCR實驗室按照專業PCR檢測實驗室標準來建設成本太高✘₪,可透過劃分區域✘₪,通風換氣和消毒清潔等方法來保障實驗室檢測工作的正常執行↟╃╃☁✘。

建議豬場檢測實驗室至少分三個區域│·:一是樣本處理區✘₪,用來做樣本前處理和核酸提取;二是試劑配製區✘₪,用來配製和分裝PCR反應液✘₪,新增核酸模板等;三是PCR 擴增區✘₪,用來上機檢測✘₪,觀測結果↟╃╃☁✘。各工作區要有一定的物理隔離✘₪,如隔板▩▩₪··、房間▩▩₪··、超淨工作臺等↟╃╃☁✘。各區的移液槍▩▩₪··、吸頭▩▩₪··、離心管等實驗用品要專區專用✘₪,不能交叉混用↟╃╃☁✘。實驗人員進入不同區域操作時最好更換衣服和手套✘₪,防止交叉汙染↟╃╃☁✘。

 

12. PCR實驗室各區功能及主要裝置有哪些₪╃•?

答│·:樣品製備區│·:主要進行樣品的收集▩▩₪··、儲存和核酸提取✘₪,本區主要裝置有冰箱✘₪,離心機✘₪,水浴鍋▩▩₪··、渦旋振盪器▩▩₪··、移液槍等↟╃╃☁✘。試劑耗材包括核酸提取試劑盒▩▩₪··、取樣棉籤▩▩₪··、唾液採集包▩▩₪··、5ml▩▩₪··、1.5/2ml離心管▩▩₪··、1.5ml離心管架▩▩₪··、大中小號槍頭▩▩₪··、生理鹽水▩▩₪··、無水乙醇或者95%酒精▩▩₪··、一次性手套▩▩₪··、口罩等↟╃╃☁✘。

試劑配製區│·:主要進行PCR反應液的配製和加樣✘₪,本區主要裝置有冰箱▩▩₪··、掌上離心機▩▩₪··、移液槍等✘₪,主要試劑耗材包括PCR反應管▩▩₪··、PCR熒光檢測試劑盒▩▩₪··、PCR管板架▩▩₪··、75%酒精棉球等↟╃╃☁✘。

PCR擴增區│·:PCR儀上機檢測↟╃╃☁✘。本區主要裝置有電腦▩▩₪··、熒光PCR檢測儀等↟╃╃☁✘。

以上儀器▩▩₪··、試劑和耗材可在本公司一站式配齊✘₪,無需額外購買↟╃╃☁✘。

 

13.PCR實驗室常用的消毒劑是那種₪╃•?

答│·:PCR實驗過程要認真細心操作✘₪,避免動作幅度過大✘₪,引起核酸形成氣溶膠汙染實驗室↟╃╃☁✘。每次實驗完畢後用10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器✘₪,及時清理實驗產生的生物垃圾✘₪,最好無害化處理或者在空曠地方燒燬↟╃╃☁✘。

 

14.PCR檢測試劑盒需-20度儲存✘₪,每次使用前融化✘₪,這樣反覆凍融會影響檢測結果嗎₪╃•?

答│·:PCR檢測試劑盒平時要儲存在-20度冰箱✘₪,用前放在室溫或4度冰箱融化↟╃╃☁✘。由於反應液中的酶和熒光物質等對溫度敏感✘₪,建議反覆使用的次數不能超過5次✘₪,最好3次左右用完↟╃╃☁✘。

 

15.通常提取試劑盒都在室溫條件下儲存✘₪,裡面的蛋白酶K也放在室溫可以嗎₪╃•?

答│·:蛋白酶K需按照試劑盒說明書要求儲存在2-8度或者-20度✘₪,不能跟提取盒的其他試劑一起放在常溫✘₪,這樣會大大影響酶的活性↟╃╃☁✘。所以建議蛋白酶K應按照說明書要求在低溫條件單獨存放和運輸↟╃╃☁✘。

 

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